인간 자유 헤임 RUO ELISA 검사 키트 연구 용품

목적:

이 키트는 전체 혈액에서 자유로운 헤임 농도를 측정 할 수 있습니다.

검사 원리

샘플에 있는 인간 자유 헤임 수치를 검사하는 키트, 정제된 인간 자유 헤임 항체를 사용하여 마이크로티터 판 Wells를 코팅하고, 고체 단계 항체를 만들고,HRP로 표시된 결합된 자유 헤임 항체, 항체 - 항원 - 효소 - 항체 복합체가 됩니다. 세탁 후 완전히, TMB 기판 용액을 추가, TMB 기판은 HRP 효소 촉매에 의해 파란색으로 변합니다.반응은 황산 용액을 첨가하여 종료되고 색의 변화는 450 nm의 파장에 분광학적으로 측정됩니다.그 다음 샘플의 인간 자유 헤임 농도는 샘플의 OD를 표준 곡선과 비교하여 결정됩니다.

기술 매개 변수:

키트와 함께 제공되는 재료:

표본 요구 사항

• 샘플 수집 후 가능한 한 빨리 추출하고 관련 문헌에 따라 추출 후 가능한 한 빨리 실험해야합니다.표본은 -20 °C에서 보존할 수 있습니다., 반복된 냉동- 녹화 주기를 피하십시오.
• NaN3가 HRP 활성을 억제하기 때문에 NaN3를 포함하는 샘플을 감지할 수 없습니다.

평가 절차

• 희석 및 샘플 추가: 희석 원래 밀도 표준은 다음 표와 같습니다:

2. 샘플을 추가하십시오: 빈 웅덩이를 별도로 설정하십시오 (빈 비교 웅덩이는 샘플과 HRP-Conjugate 반응체를 추가하지 않습니다, 다른 모든 단계 작업은 동일합니다). 테스트 샘플 웅덩이.50μl의 표준을 Microelisa 스트립플릿에 첨가합니다.시험 샘플 우물에 샘플 희석 40μl를 첨가하고, 시험 샘플 10μl를 첨가합니다 (시험 샘플 최종 희석은 5배입니다), 우물에 샘플을 추가하십시오. 가능한 한 우물 벽에 닿지 말고 조심스럽게 섞으십시오.

3잠금판막으로 접종 후 37°C에서 30분 동안 잠금합니다.

4액체를 구성합니다: 30배 (또는 20배) 의 세척 용액을 증류 물과 예비액으로 30배 (또는 20배) 희석합니다.

5세척: 닫기 판 막을 벗겨 버리고 액체를 버려서 스윙으로 건조하고 세척 버퍼를 각 우물에 넣고 30초 동안 계속 후 배수하고 5번 반복하여 탭으로 건조합니다.

6효소를 추가합니다: 빈 우물을 제외한 각 우물에 50μl의 HRP-Conjugate reagent을 추가합니다.

7큐베이팅: 3개로 작동합니다.

8세탁: 5개로 작동합니다.

9색상: 각 우물에 크로모겐 용액 A 50ul 및 크로모겐 용액 B 50ul를 첨가하고 37°C에서 10 분 동안 빛 보존을 피하십시오.

10.반응을 중지: 각 우물에 Stop Solution50μl를 첨가, 반응을 중지 ((푸른 색이 노란색으로 변합니다.)

11. 테스트: 0으로 빈 웅덩이를 채취합니다. 450nm에서 흡수량을 읽습니다.

계산

표준 밀도를 수평선으로, OD 값을 수직선으로,샘플 OD 값에 따라 해당 밀도를 샘플 곡선으로 찾아, 희석 배수로 곱하거나 표준 밀도와 OD 값과 표준 곡선의 직선 회귀 방정식을 계산합니다.표본 밀도를 계산합니다., 희석 인수로 곱하면 실제 샘플 밀도가 됩니다.